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实验室氨氮测定仪（以纳氏试剂法为例）的标准化操作需严格控制 “水样预处理 - 消解 - 显色 - 检测 - 校准” 全流程，避免因操作偏差导致误差（如预处理不当可使结果偏离 30% 以上），以下为规范化操作步骤。 一、水样预处理与消解（去干扰核心步骤） 1、水样采集与保存 用聚乙烯瓶采集水样（提前用待采水样润洗 3 次），立即加入硫酸调节 pH 至 2 以下（抑制微生物活动，防止氨氮转化），4℃冷藏保存（最长不超过 24 小时）。若为含悬浮物水样（如污泥废水），需标记 “需消解”。 2、消解（针对含氨氮的复杂基质） 适用场景：含蛋白质、尿素等有机氮的水样（如养殖废水），需通过消解将有机氮转化为氨氮。 操作：取 10mL 水样于消解管中，加入 5mL 碱性过硫酸钾溶液（浓度 40g/L），旋紧盖子后放入高压蒸汽灭菌器，121℃消解 30 分钟；冷却后用纯水定容至 25mL（消解过程中水分蒸发需补回）。 3、干扰去除 浊度干扰：经 0.45μm 滤膜过滤（滤膜需用纯水煮沸 10 分钟，去除残留氨氮）； 金属离子干扰：加入 1mL5% 酒石酸钾钠溶液（掩蔽 Ca²⁺、Mg²⁺），混匀后静置 5 分钟； 余氯干扰：每 100mL 水样加入 0.1mL 硫代硫酸钠溶液（10g/L），搅拌至无气泡（用余氯试纸验证余氯已去除）。 二、显色反应（精度控制关键） 1、试剂准备 纳氏试剂需现配现用（储存不超过 7 天），配制时严格按 “碘化汞 - 碘化钾 - 氢氧化钠” 顺序溶解（避免碘化汞析出）；用前需静置过滤（去除颗粒杂质，防止吸光度异常）。 2、规范化显色 取 10mL 预处理后水样于比色管中，加入 1mL 酒石酸钾钠溶液（已做干扰去除可省略）； 沿管壁缓慢加入 1mL 纳氏试剂（避免局部浓度过高产生沉淀），轻轻颠倒混匀（禁止剧烈振荡，防止气泡产生）； 置于暗处常温静置 15 分钟（避光防止显色产物分解），确保黄棕色络合物生成稳定。 三、检测与数据记录 1、仪器预热与比色皿准备 测定仪提前 30 分钟开机预热（确保光源稳定），比色皿用纯水洗净后，用显色后的溶液润洗 2 次（避免残留水分稀释样品），外壁用无绒布擦干（指纹会导致吸光度偏高）。 2、检测操作 将比色皿放入样品室（确保光路对准标记线），选择 420nm 波长，先测空白样（10mL 纯水 + 1mL 纳氏试剂）调零；依次检测标准系列（0.1-2mg/L）和样品，每个样品连续测 2 次（偏差需≤3%，取平均值），记录吸光度和对应浓度。 四、数据校准与质量控制 1、标准曲线校准 每次检测前需绘制标准曲线：用氨氮标准储备液（100mg/L）稀释成 0.1、0.5、1.0、2.0mg/L 系列，按显色流程检测后，以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标生成曲线（线性相关系数 R² 需≥0.999，否则重新配制标液）。 2、质控验证 加标回收率：取 5mL 样品加入 5mL 已知浓度标液，检测后计算回收率（需在 85%-115% 之间）； 平行样偏差：同一样品做 3 次平行检测，相对标准偏差（RSD）需≤5%，否则排查显色时间或试剂问题。 3、数据修正 若样品经稀释或消解，需按稀释倍数（如定容至 25mL 需 ×2.5）或消解损失率（通过空白对照修正）对结果修正，最终结果保留两位有效数字。 标准化操作的核心是 “全程可追溯”：每步操作需记录（如消解温度、显色时间），异常数据需标记原因（如 “浊度干扰未完全去除”）。通过严格控制预处理、显色条件及校准流程，可将检测误差控制在 5% 以内，满足实验室质控要求。
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